Luka je tudi tokrat pridno delal in pridobival nova znanja, svoj dan pa
opisal takole: »Kot ponavadi so me tudi tokrat v pisarni pričakali zaposleni,
ki so polni energije ravnokar začeli svoj delovni dan, in me povabili, da se
jim pridružim pri jutranji kavi. Časa za počitek pri njih ni in par pridnih rok
jim še kako prav pride, zato sva se s sodelavcem odpravila v prostor, kjer pripravljajo vzorce za kasnejšo uporabo
metode verižne reakcije s polimerazo ali bolj znane pod angleško kratico PCR
(Polymerase chain reaction). Metoda verižne reakcije s polimerazo je metoda, ki
omogoča kopiranje odsekov DNA s pomočjo encima DNA polimeraze. Običajno se
uporablja v raziskovalnih laboratorijih pri zgodnjih fazah obdelave te
molekule, za sekvenciranje, za odkrivanje prisotnosti ali odsotnosti določenega
gena, za pomoč pri identifikaciji patogenov in pri generiranju forenzičnih DNA
profilov iz majhnih količin začetnega vzorca. Ne glede na to, kakšen je vzorec,
je postopek dela vedno enak. Dodati moramo pet ključnih sestavin in sicer
vzorec DNA, ki ga želimo kopirati, dva kratka odseka DNA, ki sta komplementarna
začetnemu in končnemu delu segmenta, ki ga želimo kopirati, nukleotidne baze,
ki so potrebne za izgradnjo nove molekule in encim Taq polimerazo in pufer, ki zagotavlja
primerno okolje za potek reakcij. Sam proces je sestavljen iz treh faz, vsaka
od teh pa je pogojena s kontroliranimi temperaturnimi spremembami. V prvi fazi
zaradi segrevanja na 92 ° C pride do denaturacije dvojne vijačnice DNA, tako da
se ta loči na dve enojni verigi. V drugi fazi se temperatura spusti v razpon od
37 °C do 55 °C, kar omogoči prileganje začetnih oligonukleotidov na matrico. V tretji fazi tempertura ponovno
naraste in sicer na 72°C, kar je optimalno za delovanje posebnega encima Taq
polimeraze, ki enojni vijačnici doda komplementarne DNA baze in tako tvori novo
željeno dvojno vijačnico. Alejander se je izkazal kot zelo dober učitelj, saj
mi je na zgoraj opisan preprost način predstavil delovanje sicer nekoliko
kompleksnejšega procesa. Po opazovanju njegovega praktičnega prikaza sem tudi
sam lahko začel z delom in ga nadaljeval skoraj ves dan, saj je v vrsti čakalo
veliko vzorcev tako, da sva jih sproti pripravljala in zaganjala naprave. kjer
kontrolirano potekajo reakcije. Medtem ko so naprave opravljale svoje delo, sem
pripravil agarozne gelske plošče za gelsko elektroforezo, ki je zadnji korak v
vrsti postopkov in analiz današnjih vzorcev. Za zelo hrupen, a zabaven zaključek
dneva je poskrbela sodelavka Pilar, ki se je iz rastlinjaka vrnila s številnimi
listi in vejami rastlin. Da bi razbila
njihove celične stene, sva jih natresla v posebne dvodelne vrečke in jih
zdrobila s kladivom. Dodala sva PBS pufer in jih postavila v hladilnik,
kjer bodo počakali na nadaljno obravnavo. Kar malce utrujen, a zadovoljen z opravljenim
delom in pridobljenim znanjem, sem se odpravil proti apartmaju.«
Naprava za izvajanje verižne reakcije s polimerazo |
Brina in Lea sta današnji dan preživeli zelo sproščeno, kajti v laboratoriju ni bilo veliko dela. Opravili sta teste krvi in urina in pripravili nekaj zdravil.
Popoldne smo vsak po svoje preživeli v centru Valencije, kjer smo izbirali darila za svoje domače in se zopet razvajali z zanimivimi okusi lokalnih jedi.
Zvečer pa bomo ob klepetu, kartah in glasbi analizirali današnji dan.
Komentarji
Objavite komentar